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蛋白檢測服務

ELISA檢測

 

ELISA(酶聯免疫吸附)檢測是指將可溶性的抗原或抗體結合到固相載體上,利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。

一、實驗原理

結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上 。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。

二、實驗流程

三、樣本制備

1. 檢測的樣本為細胞培養上清、細胞粗提液、人和動物的血清、血漿等。

(1)血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(200-3000轉/分),收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

(2)血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

(3)組織標本:切割標本后,稱取一定量組織,加入PBS,用手工或勺漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。對于植物組織,可以在液氮中充分研磨勻漿。

(4)動物細胞:用PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右。超聲波破碎細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

2. 樣本收集后應立即保存于-20度條件下,若長期保存應保存于-70度條件下。

3. 樣本量要求:一個指標做復孔檢測應不少于250μl,做單孔檢測應不少于120μl。建議若樣本量充足最好提供500μl以上。

四、結果交付

原始數據及實驗報告。

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